Иммуноферментный анализ при гепатитах

Иммуноферментный анализ - ИФА - является универсальным методом иммунологической диагностики, который широко используется на практике. Он предназначен для выявления вирусных белков (антигенов) или антител, которые вырабатываются иммунной системой в ответ на проникновение вирусов в организм человека. Эти белки являются своеобразными маркерами (метками) или признаками, наличие которых позволяет поставить точный диагноз, оценить характер заболевания, помочь лечащему врачу выбрать правильное лечение. Этот метод основан на известном взаимодействии ?антиген-антитело?.

Для определения антигенов различные коммерческие фирмы выпускают тест-системы, которые представляют собой 96-луночные полистироловые планшеты. На дно лунок заранее сорбируют (?пришивают?) антитела к тому или иному антигену возбудителя, например, к поверхностному антигену вируса гепатита В - HBs-антигену. На первом этапе в каждую лунку добавляют образец, например, сыворотку крови больного в разных разведениях, содержащую пока не определенный вирусный белок (антиген). Если этот белок (антиген) ?узнал? свое антитело, то происходит их связывание. Это означает, что сыворотка больного содержит тот антиген, антитела к которому сорбированы на дне планшетки.

Для того чтобы увидеть результаты этой реакции, существует следующая стадия, на которой к комплексу антиген-антитело добавляют соединение, которое связывается с антителом. Это соединение содержит фермент, например, пероксидазу. При добавлении к нему субстрата происходит расщепление последнего с последующим окрашиванием раствора в желто-коричневый цвет. На следующей стадии проводят тщательную промывку каждой лунки от непрореагированных компонентов. В тех лунках, где антиген, как в нашем случае, полностью связан с антителом, он уже не может взаимодействовать с добавляемым соединением. Поэтому оно удаляется из лунки при отмывании.

По мере разведения сыворотки содержание в ней антител снижается, и они уже не в состоянии полностью связать антиген. В этих лунках соединение, содержащее фермент, связывается с антигеном и остается в лунке после промывания. На следующей стадии добавляют субстрат и смотрят результаты реакции, которые оценивают визуально или с помощью спектрофотометра.

Таким образом, мы выявили, что в образце сыворотки от больного содержится HBs-антиген. Можно также выяснить его количество или титр, определив то последнее разведение сыворотки, где появилось желтое окрашивание. Чем больше степень разведения, тем больше вируса содержится в крови больного.

Таким же образом можно определить наличие антител к тому или иному возбудителю вирусного гепатита. Только в этих случаях используют диагностические тест-системы с ?пришитыми? на дно лунок не антителами, а известными антигенами.

Достоинствами этого метода являются высокая чувствительность и специфичность, простота постановки реакции, возможность обследования одновременно большого количества пациентов. Среди недостатков метода можно отметить необходимость специального дорогостоящего оборудования и соответствующей квалификации персонала.

А.И. Mигyнoв

Вирусные гепатиты, подробнее.

Туберкулез

Туберкулез это инфекционное заболевание, которое может поражать легкие, кожу, кости и др. часто приводит к инвалидности, возможен летальный исход

Основным источником возбудителя является человек, больной легочной формой туберкулеза и выделяющий микобактерии из дыхательных путей. Период заразительности человека равен всему периоду заболевания, способного длиться годами и даже десятилетиями. Интенсивность выделения микобактерий больным увеличивается в период обострений (чаще весной и осенью). Туберкулез передается воздушно-капельным (частички мокроты и носоглоточной слизи, выделяющиеся в воздух при кашле, чиханье, разговоре и др.) и воздушно-пылевым (насыщенная микобактериями взвешенная в воздухе пыль) путями передачи.

Естественная восприимчивость людей высокая. Наиболее подвержены заболеванию дети в возрасте до 3 лет. Заболеванию способствуют различные виды иммунодефицита. Чаще болеют дети первых двух лет жизни, подростки и пожилые люди в возрасте 60 лет и старше. Мужчины болеют чаще, чем женщины. У женщин, иногда туберкулез выявляется на гинекологическом осмотре.

В детском возрасте туберкулез возникает в легких, реже в других органах и может возникнуть как органное поражение (бронхоаденит, бронхо-легочное поражение, казеозная пневмония), так и генерализация процесса (милиарный туберкулез, туберкулезный менингит), а также сформироваться очаги в костях, других органах.

К основным симптомам легочного туберкулеза относится длительная невысокая (до 38) температура, кашель (сухой или с легко отделяемой мокротой), кровохарканье, одышка.

Условий для расцвета туберкулеза в России очень много. Переполненные рынки, вокзалы, тюрьмы, квартиры, низкий уровень доходов, постоянные стрессы благоприятствуют распространению туберкулеза. Вряд ли социально экономическая ситуация сможет быстро измениться, поэтому придется защищаться от туберкулеза индивидуально. То есть делать прививки.

В России существует фактически одна прививка от туберкулеза - БЦЖ. Эффективность вакцинации достигает 95%. Иногда, после прививки бывает болезненность и покраснение в месте укола. Прививку от туберкулеза делают в родильном доме новорожденному, потом вакцинацию повторяют в 7, 14, 22 и 27лет.

С туберкулезом в нашей стране профессионально борются врачи-фтизиатры. Не смотря на скудные возможноси диагностики и лечения, низкую зарплату, фтизиатрическая служба, врачи фтизиатры до сих пор работают весьма эффективно. Правда, если ситуация в медицине в целом не изменится - то рано или поздно фтизиатры не смогут справиться со всеувеличивающейся нагрузкой и туберкулез начнет расправляться с людьми столь же эффективно, как и в 19 веке.

Микробиологические посевы различного материала (мокрота, гной, отделяемое свищей, моча, плевральная и спинномозговая жидкость, промывные воды из бронхов или желудка и др.). Этот анализ выполняется достаточно редко, его достоверность и точность достаточно высока, если микроб вырастет , но есть большой риск ложноотрицательного ответа, когда бактерия есть, но размножиться вне организма - в лаборатории на чашке не смогла. Результата анализа нужно ждать более недели. Микроскопия мазков (например мокроты, под обычным или специальным люминесцентным микроскопом) после специального окрашинивания, - быстрый метод, но велика вероятность человеческой ошибки, отсюда невысокая достоверность результатов, есть риск принять за микобактерию туберкулеза какую нибудь другую, похожую бактерию. Самый известный метод - аллергическая проба с туберкулином: внутрикожная проба Манту (результат оценивается через 72 ч) или скарификационная ( процарапанная ) проба Пирке (учет через 48-72 ч). Это самый дешевый метод, но он не очень точен и надежен.

Для постановки диагноза так же делают рентгеновский снимок легких и осматривают больного.

Например определением титра антител к туберкулезу. В зависимости от тест-системы и прочих условий результат можно получить через час или через несколько дней. По этому анализу крови можно проверить наличие иммунитета к туберкулезу или эффективность вакцинации (анализ методом ИФА) стоимость около 90р. Метод не очень распространен, так как при данном исследовании используется много импортных материалов. Достоверность и точность метода 75-95%. Самый современный метод нахождения микроба - ДНК-диагностика, метод ПЦР. Такой анализ можно сделать только в платных лабораториях. На исследование сдают мокроту или другое отделяемое. Этот метод очень точный (90 - 100%), стоимость исследований около 80р. срок ответа 2-3 дня.

По телефону 247-88-63 можно получить справку о рассценках и адресах медицинских кабинетов, в которых можно сдать эти анализы в Москве.

Посев на специальную среду Левенштейна - Йенсена (учет результатов такого посева проводят через 2-4 нед). У этого метода, как и у других посевов достоверность и точность достаточно высоки, но если микроб не смог вырасти - ответ будет ложноотрицательным. Еще иногда ставят биопробу на морских свинках, у которых через 10-12 дней в месте инъекции возникает специфический инфильтрат, а через 2-4 мес. развивается генерализованный туберкулез.

Словарь